Phân tích Proteomics


Giải trình tự peptide đầu N và đầu C của protein là một trong những tiêu chí quan trọng nhất theo hướng dẫn ICH Q6B, của tổ chức Y dược Châu Âu EMA và theo tiêu chuẩn FDA để nhận biết cấu trúc tự nhiên và tính đồng nhất của protein/kháng thể, đảm bảo protein được biểu hiện có cấu trúc hoàn chỉnh hay chưa. 

1. Giới thiệu

Giải trình tự đầu N và đầu C của protein có thể cho bạn biết về protein/kháng thể hoặc enzyme ở các giai đoạn nào của quá trình chế tạo thuốc. Giải trình tự đầu N/C cũng giúp chứng minh tính ổn định và so sánh giữa các mẻ sản xuất hoặc cho biết trình tự peptide tín hiệu đã được cắt hay chưa.

Mức độ cắt lysine đầu C của kháng thể là một tính chất rất quan trọng do đó cần được kiểm soát chặt chẽ. Với hơn 10 năm kinh nghiệm trong lĩnh vực proteomics, chúng tôi có nhiều kinh nghiệm trong việc hỗ trợ, tư vấn và thực hiện phân tích nhanh nhất, chính xác nhất.

2. Phương pháp giải trình tự đầu N/C

T
ùy thuộc vào trình tự amino acid đầu N/C của protein đích, chúng tôi sẽ lựa chọn phương pháp giải trình tự thích hợp nhất

a. Phương pháp Edman sequencing

Phương pháp Edman sequencing sử dụng các chất PITC để gắn với các nhóm amino aicd đầu N và cắt các amino aicd này ra khỏi protein. Phức hợp tạo ra giữa PITC và amino aicd được chuyển sang các ống nghiệm mới và được chuyển hóa thành nhóm PTH. Sau đó các amino aicd cắt ra này được phân tích bằng phương pháp sắc ký HPLC. Chu trình của phản ứng phân hủy Edman được lặp lại, mỗi chu kỳ xác định được một amino aicd đầu N. Do đó chúng ta có thể xác định 5, 10 hoặc 20 amino aicd tùy thuộc vào nhu cầu.

b. Phương pháp khối phổ MALDI-TOF ISD và LC-MS/MS

Phương pháp khối phổ có thể được sử dụng để giải trình tự peptide cả đầu N và đầu C. Bằng việc kết hợp với chiến lược sử dụng enzyme cắt đặc hiệu, chúng tôi có thể sử dụng phương pháp peptide mapping bằng LC-ESI-MS/MS để xác định trình tự đầu N và C của protein.

Với trình tự protein lý thuyết đã biết, chúng tôi sử dụng enzyme cắt đặc thù, đoạn peptide đầu N/C được xác định và lựa chọn giải khối lượng phù hợp. Cài đặt thông số m/z phù hợp để lựa chọn đoạn peptide đích đầu N/C để tiến hành phân mảnh, thu dữ liệu phổ khối. Sử dụng phần mềm chuyên dụng MASCOT để xác định trình tự peptide từ phổ khối thu được.


3. Liên hệ gửi mẫu: 

Quý khách vui lòng  liên hệ để biết thêm chi tiết. Hotline 0978.755.926

 
 
 
 

Bài viết cùng chuyên mục

Thông tin liên hệ

Vui lòng liên hệ để biết thêm chi tiết
Hotline 0978.755.926
Email: minhphd@gmail.com;          Web: www.phantichprotein.vn

van chuyen bac nam, chuyển hàng bắc nam, vận chuyển hàng hóa bằng đường biển, Trầm hương